Descripción del Protocolo
Contar con un cultivo de células estromales (ejemplo: OP-9, HS5) y un cultivo de células leucémicas (CCRF) por separado.
Preparar agarosa al 1% (ver protocolo [Electroforesis de ADN]), llevarla a ebullición y mantener caliente.
Preparar una placa de 96 pozos con fondo cóncavo y por columna agregar a cada pozo 100\(\mu\)l agarosa 1%, recubrir el pozo y retirar la agarosa, repetir el proceso para cada pozo de la columna.
Dejar una columna sin recubrir de agarosa y agregar antibiótico al 1%.
Repetir los dos pasos anteriores para recubrir toda la placa (Fig. 1).
Realizar el conteo celular de las células estromales.
Sembrar 10,000 células por pozo en 100\(\mu\)l de medio, tratar de no mover la placa hasta el siguiente día.
Una vez formada la esfera colocar 10,000 células leucémicas y nuevamente esperar un día sin mover la placa.
Después de dos días observar en el microscopio invertido, el esferoide debe estar formado.
Diagrama de Flujo
Anexos
Soluciones
Documentos de ?@sec-ref
(cite?) Shain KH, Dalton WS, Tao J. 2015. The tumor microenvironment shapes hallmarks of mature B cell malignancies. Oncogene 34:4673-4682.