Tinción de superficie para citometría de flujo

Laboratorio de Inmunometabolismo

CULTIVO CELULAR
Autor/a

omclab

Fecha de publicación

13 de junio de 2026

Resumen

Extraer células linfoides de pulmón de ratón para los fines que serequiera.

Descripción del Protocolo

NotaPasos

  • Tinción de viabilidad

    • Agregar 1.5 x106 células en tubos para citometría de flujo, centrifugar a 1500rpm/4°C/5 minutos.

    • Lavar: Agregar 3ml de PBS 1x. Centrifugar a 1500 rpm/4°C/5 minutos. Decantar el sobrenadante.

    • Agregar la tinción de viabilidad e incubar 30 minutos/obscuridad/4ºC.

    • Lavar.

  • Tinción de superficie

    • Resuspender las células en 200\(\mu\)l de buffer de FACS.

    • Agregar 2\(\mu\)l gama globulinas humanas e incubar 20 minutos/obscuridad/4ºC.

    • Agregar anticuerpos de superficie titulados, incubar 30 minutos/obscuridad/4ºC.

    • Lavar: Agregar 3ml de buffer de FACS. Centrifugar a 1500 rpm/4°C/5 minutos. Decantar el sobrenadante.

    • Agregar solución fijadora (500\(\mu\)L), incubar 20 minutos/obscuridad/4ºC.

    • Lavar.

    • Resuspender las células en 200\(\mu\)l de buffer de FACS.

    • Analizar la muestra inmediatamente o en los 2 días posteriores a la tinción.

  • Tinción intracelular

    • Realizar tinción de superficie.

    • Resuspender las células en 1ml de buffer de permeabilización.

    • Lavar: Agregar 3ml de buffer de permeabilización. Centrifugar a 1500 rpm/4°C/5 minutos. Decantar el sobrenadante.

    • Agregar anticuerpos intracelulares e incubar 30 minutos/obscuridad/4ºC.

    • Lavar.

    • Resuspender en 200\(\mu\)L de solución fijadora.

    • Analizar la muestra inmediatamente o en los 2 días posteriores a la tinción.

  • Conservar las muestras teñidas en refrigeración hasta realizar el análisis.

Diagrama de Flujo

Figura

Anexos

Soluciones

Solución de FACS

Header 1 Header 2 Header 3
PBS 490ml 98%
SFB 10ml 2%

Nomenclatura

SFB: suero fetal bovino
PBS: buffer de fosfatos

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