Citocinas en explantes

Descripción del Protocolo

NotaPasos

• Eutanizar el raton
• Extraer el intestino en esterilidad
• Cortar fragmentos de 5mm
• Colocar en placa de 96 pozos de fondo plano con RPMI 10% SFB
• Re-estimular con anti CD3/CD28 o Iono/PMA

1. Sobrenadante
   • Cultivar 12h a 37ºC
   • Colectar el medio de cultivo
   • Cuantificar por ELISA o congelar
2. Intracelular
   • Colocar medio fresco al explante
   • Agregar 5 µg/ml Brefeldina A
   • Cultivar 5h a 37ºC
   • Recuperar el tejido y homogenizar en RIPA
   • Centrifugar 5’ a 13,000 rpm
   • Colectar el sobrenadante
   • Cuantificar por ELISA o congelar

Notas

Diagrama de Flujo

Figura

Anexos

Soluciones

Documentos de ?@sec-ref

actualizaciones

versión		:Elaboró:	Revisó
2025.01	inicial	Oscar Medina Contreras	Oscar Medina Contreras